当常温物质经入射光照射,吸收光能后进入激发态,并且立即激发并发出出射光,那么这种出射光就被称之为荧光。荧光测量是利用灵敏的探测器和高效率的滤光片,将检测样本发出的微弱信号光和高强度的激发光区分出来,并通过探测器对区分出来样本的微弱信号进行检测。
荧光激发光谱可以通过有效的荧光激发波长来进行表现,并能够得到荧光转化效率。利用稳定可靠的激发源和发光二极管作为激发光,虽然大多数情况下,激发波长和物质的发射波长会发生重叠,但当一个短波长的激发光在一点激发物质,我们就能在物质发散的其他位置观察到比激发光更长波长的光,以此区分出长波为荧光发射波长,短波段为激发波。
3.1 光谱仪:鉴于荧光较为微弱的特性,通常需要高灵敏度光谱仪进行检测,这类光谱往往采用背照减薄型CCD,部分还带有CCD制冷,以保证信噪比。
3.4激发光源:激发光源的选择具有多样性,比如LED光源、激光等等。使用LED的中心波长最好接近激发光源波长;所选择激光的强度要能被光谱仪检测到,才能保证发射荧光被检测到。如果使用带宽光源(即连续光谱光源),需要添加单色滤光片滤出单色光。
3.5 滤光片:带通滤光片是窄化激发光源的最简单选择,该滤光片由长通和短通两块滤光片组成,通过调节短通滤光片的位置,可以实现单色激发光。如果荧光物质的激发波长未知,客户可使用可调线性滤光片,可以设置带宽20nm到100nm不等的单色波作为激发波长,还可以单独使用长通和短通滤光片,设置起始波长和截止波长。
3.6 采样附件(光纤、荧光反射探头、比色皿卡槽等):模块化的荧光测量系统的优点在于使用单个激发光源和检测器的情况下,获得数据具有建议性、高效性、即时性。通过改变光纤的连接位置,可以实现0°, 90°和180°的不同收光角度进行不同形式的光学测量。使用荧光反射探头,可以直接接触样品表面测量高浓度的液体样品、固体或者粉末,获取样品的荧光散射光。
比色皿卡槽,更换其中的透镜可以提高样品荧光的聚集。使用比色皿,可以简便高效率地实现nmol浓度物质的荧光测量。使用配有4通道的比色皿卡槽,由于使用空间耦合的方式,具有高耦合效率。
3.7光谱仪控制软件:专用软件可以让使用者更好地使用光谱仪进行各种应用。当使用光谱仪控制软件进行荧光测量时,经常使用到两种测量模式:QuickView mode(快速扫描)和Relative Irradiance mode(相对辐射)。